显微镜滤光片（Microscope Filter）是安装在显微镜光路中的一种光学元件，用于选择性透过或阻挡特定波长（颜色）的光，从而优化成像效果或实现特殊观察需求。它在荧光显微镜、偏光显微镜、相差显微镜等高端应用中尤为关键。
一、滤光片的核心作用
1. 控制光源波长
- 只允许特定波长的光通过，排除杂散光干扰（如荧光观察中激发光的隔离）。
2. 增强对比度
- 通过过滤背景光，突出样本的特定结构（如染色部位或荧光标记）。
3. 保护样本和探测器
- 阻挡紫外或强光，避免样本损伤或相机过曝。
二、常见类型及用途
1. 激发滤光片（Excitation Filter, EX）
- 位置：光源与样本之间。
- 功能：只让激发荧光染料的特定波长通过（如蓝色光激发绿色荧光）。
- 示例：DAPI荧光用350nm波段，FITC用490nm波段。
2. 发射滤光片（Emission Filter, EM）
- 位置：样本与探测器之间。
- 功能：仅透过荧光信号，阻挡激发光（如只接收520nm的绿色荧光）。
3. 二向色镜（Dichroic Mirror）
- 位置：激发与发射光路的交叉处。
- 功能：反射激发光到样本，透射荧光信号到探测器。
4. 中性密度滤光片（ND Filter）
- 用途：均匀减弱光强，避免样本光漂白或相机过载。
5. 彩色滤光片
- 用途：普通光学显微镜中增强对比度（如蓝色滤片观察血细胞）。
6. 红外/紫外截止滤光片
- 用途：阻挡红外或紫外干扰，保护镜头和探测器。
三、关键参数
1. 中心波长（CWL）：滤光片透光率最高的波长（如490nm）。
2. 带宽（FWHM）：透光波长范围（如±20nm）。
3. 透过率（Transmission）：目标波长的光通过效率（通常>90%）。
4. 截止深度（Blocking）：对非目标光的阻挡能力（如OD6表示阻挡99.9999%）。
四、应用场景示例
1. 荧光显微镜
- 组合使用激发滤光片、二向色镜、发射滤光片（如“GFP三件套”）。
2. 相差显微镜
- 绿色滤光片（546nm）提升相位差成像清晰度。
3. 病理学染色观察
- 红色滤片增强HE染色中细胞核的对比度。
五、主流品牌
1. Chroma（美国）：高端荧光滤光片，专为多色荧光设计。
2. Semrock（美国）：超窄带宽、高透过率，适合精密研究。
3. Omega Optical（美国）：性价比高，覆盖常见荧光染料。
4. ZEISS/徕卡/尼康：原厂配套滤光片，兼容性强。
六、注意事项
- 匹配染料：滤光片需与荧光染料的激发/发射光谱匹配（查阅染料说明书）。
- 多色荧光：避免通道串扰，需选择窄带滤光片。
- 清洁方法：用无尘棉签蘸酒精轻擦，避免硬物刮伤镀膜。
如果需要为特定显微镜或实验选择滤光片，建议提供显微镜型号和观察目标（如荧光染料类型），可进一步推荐具体方案。
